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Hibridização com sondas de DNA:

pesquisa específica de um gene

hibridização de DNA é um fenômeno natural, que é uma das técnicas fundamentais da tecnologia do DNA recombinante.

A hibridização da AON é o processo em que duas fitas de DNA de fita simples com

uma seqüência de bases complementares, se reúnem para fazer uma molécula de cadeia de DNA

nd dupla corretamente emparelhados.

Mas por hibridização de DNA é uma técnica fundamental para biotecnoloqía? Pois permite identificar a presença de um gene que codifica uma proteína de interesse em um cromossomo. Para

Assim, o que é feito é um teste de hibridização com sondas de DNA.

sonda AON é um fragmento de DNA artificial single-stranded marcado com o isótopo radioativo

seqüência de produtividade ou de fluorescência e de quem é complementar à seqüência de nucleotídeos

gene a ser detectado.

Uma sonda de DNA que tem hibridizados detecção é alcançada através de um grande número de métodos,

exemplo, a impressão de um filme radiográfico.

Quando você quer analisar milhares de genes simultaneamente usando microarrays ou chips

AON, cuja tecnologia tem revolucionado a genética da mesma forma que os chips de silício re-

as revoluções da indústria de computadores.

Os biochips são lâminas de vidro e, posteriormente, fixadas em cada uma das suas células microscópicas

um pequeno número de fragmentos de seqüência de DNA de fita simples de nucleotídeos que atua como uma sonda para um determinado gene.

Os milhares de células microscópicas são colocadas em uma grade sobre a lâmina de vidro (tamanho não exceder o tamanho de um selo postal) e permitir o desenvolvimento de milhares de paralelo

reações de hibridização conhecida como a localização exata de cada sonda sobre o biochip, qualquer

De fragmentos de DNA que hibridiza com um deles pode ser identificado como um gene particular simplesmente localizar a posição da sonda, que é anexado ao biochip.

Biochip tecnologia é utilizada para:

Mutacionesen detectar genes que causam doenças como a hemofilia, a fibrose

fibrose cística, doença de Huntington e distrofia muscular de Duchenne.

• Controlar a expressão de genes em linhagens de células humanas de câncer

• diagnóstico de doenças infecciosas.

Personalizado tratamento medicamentoso, porque em termos de diferenças genéticas

produzem diferentes reações individuais ao tratamento.

• Sugerir novas técnicas diagnósticas ou terapêuticas.

clonagem de DNA

A clonagem palavra significa produção de animais geneticamente cópias idênticas de reprodução

produção assexuada. A população resultante é chamado de clone. Mas. O que isso

palavra, quando aplicada a ADN7

Clonagem de um fragmento de AON é a obtenção de milhares de milhões de co-l

PIAS idêntico ao fragmento. ~

Para clonar um fragmento de DNA. este deve ser adicionado a uma molécula transportadora. também chamado de vetor.

Um vector de clonagem é uma pequena molécula de DNA capaz de entrar em uma bactéria e eu

auto-replicar nele. . .-.. J

Hoje. Há muitos vetores de clonagem, embora os mais utilizados são os plasmídeos bacterianos.El método de clonagem é a seguinte

O plasmídeo eo DNA a ser clonado foi cortado com a mesma enzima de restrição. Com

plasmídeos corte e fragmentos de DNA obtidos plasmídeos recombinantes

incubadas com uma cultura bacteriana (geralmente cou Eseheriehia). condições adequadas para cada incorpora apenas um plasmídeo recombinante. Este processo é chamado de transformação.

Como os plasmídeos carregam um gene que confere resistência a um antibiótico, as bactérias

processado pode ser selecionado, colocando-os em placas de cultura em meio

contendo o antibiótico. Só as bactérias carregando o plasmídeo recombinante será re-

resistente, capaz de sobreviver e formar colônias nas placas. Outros. que não foram processados ​​porque eles não carregam o plasmídeo recombinante. morrer

Cada colônia de bactérias transformadas foram isolados e mantidos em condições de crescimento

para. Como as bactérias casal, também duplica o número de bananas smid re-

combinantes e fragmentos de DNA são inseridos

Os clones biblioteca AON obtidos a partir de uma biblioteca de DNA de interesse é chamado

AON ou biblioteca genômica.

A partir de pequenas quantidades, a AON pode ser copiado

ou amplificar muitas vezes dentro de um tubo

teste, sem clonagem.

A técnica é baseada em um processo chamado de reação

reacção de cadeia (PCR Inglês

polymerase chain reaction).

A PCR é uma reação em cadeia que origina milhões

ções de cópias de um segmento específico da AON

repetindo vários ciclos de replicação

ção da AON in vitro.

O material de partida é a AON mostra ser dublado, que não precisa ser purificada suficiente dos quatro nucleotídeos, duas moléculas AON curto de filamento único ou primers que são complementares às seqüências do gene para AON a ser copiado, e um resistente ao calor polimerase AON, como a Taq (a partir da bactéria Thermus aquatilus, descoberto perto dos gêiseres Yellowstonel. somando-se os

novas redes AON.

PCR é uma ferramenta usada rotineiramente para amplificar segmentos da AON de uma ampla variedade de fontes, por exemplo, AON de pequenas quantidades de sangue, tecidos ou sêmen feita em uma cena de crime, os microrganismos AON patógelOS para AON identificação de células embrionárias para fazer um diagnóstico pré-natal de doenças genéticas.