Cultivo e Identificação de Bactérias

Subcultivo em Caldo Tetrationato (Kauffmann)

O caldo Tetrationato é melhor aproveitado quando utilizamos o meio de Ágar SS para o subcultivo, dentro de 12 a 18 horas após a inoculação.

Subcultivo em Caldo Gram-Negativo (GN Hajna Broth)

Para o caldo Gram-Negativo, recomenda-se o subcultivo dentro de 4 a 6 horas após a inoculação. É recomendado subcultivar em Hektoen ou XLD.

Avaliação do Crescimento nos Meios de Plantio Primário

Após o plantio, esses meios devem ser incubados por 24 horas a 35 ± 1 ºC e avaliados no dia seguinte:

• Meios sólidos Ágar MacConkey e SS: Verificar o crescimento de colônias lactose negativas em MacConkey e de colônias lactose negativas e/ou produtoras de ácido sulfídrico (H₂S – colônia negra) em SS e proceder à identificação - TRIAGEM.
• Caldos de enriquecimento: Repicar para outras placas de Ágar MacConkey e SS após 4 a 18 horas (tempo crítico de cada meio relatado acima), incubar e repetir o procedimento acima.

Triagem das Colônias Suspeitas

Um bom meio utilizado na triagem é o Surraco ou o Ágar Tríplice Açúcar Ferro (TSI).

Cada colônia suspeita é isolada para o Surraco e incubada por 18-24 horas a 35 ± 1 ºC. Com uma agulha bacteriológica, transferir uma colônia para cada tubo do meio de triagem.

Interpretação do Meio Surraco

O meio Surraco apresenta como componentes lactose, sacarose, ureia e indicador de pH.

• Fermentação de lactose e/ou sacarose: O meio acidifica, resultando em uma cor alaranjada a vermelha.
• Utilização de ureia: O meio alcaliniza, gerando uma cor azul.
• Ausência de fermentação e utilização de ureia: O meio apresenta a mesma cor amarelo-esverdeada e turvação, indicando que a bactéria não fermenta lactose e sacarose e não utiliza ureia.
• Meio Estéril: Amarelo Esverdeado.

Resultados Típicos no Meio Surraco

• Shigella e Salmonella: Mesma cor do meio, porém turvo.
• Escherichia coli e outros coliformes: Laranja ou avermelhado.
• Proteus e Morganella: Azul.

Após 24 horas de incubação, observar se houve utilização dos açúcares. Se o meio permaneceu inalterado e turvo, fazer nova triagem.