Desinfecção e Esterilização: Processos e Condições Microbianas

Desinfecção

Processo de destruição de microrganismos na forma vegetativa presentes em artigos, por meios físicos ou químicos, com exceção de esporos bacterianos.

Alto Nível

Destroem todas as formas vegetativas de microrganismos, inclusive Mycobacterium tuberculosis, vírus lipídicos e não lipídicos, fungos e uma parte dos esporos. Exemplos: glutaraldeído 2% (mínimo de 30 minutos), peróxido de hidrogênio 3-6%, formaldeído 1-8%, ácido peracético e composto clorado a 10.000 ppm.

Médio Nível

Inativam o bacilo da tuberculose, bactérias na forma vegetativa, a maioria dos vírus e fungos, exceto esporos bacterianos. Exemplos: compostos clorados de 500 a 5000 ppm, álcool 70% (tempo de contato mínimo de 10 minutos).

Baixo Nível

Eliminam a maioria das bactérias, alguns vírus como o HIV, o da Hepatite B e Hepatite C, fungos. Não destroem microrganismos resistentes como bacilo da tuberculose e esporos bacterianos. Exemplos: compostos fenólicos 0,5-3%, compostos de iodo, quaternário de amônia.

Limpeza Reconcorrente em Superfícies Próximas ao Paciente

• Maçanetas, piso, banheiro, pias e torneiras, mesa acessória, bancada, grades e manivelas, campainha.
• Uso de desinfetante nestas superfícies:
  • Hipoclorito de sódio 0,1 a 0,5%
  • Álcool a 70%
  • Ácido peracético 0,5%

Esterilização

É o processo que promove a completa eliminação ou destruição de todas as formas de microrganismos presentes: vírus, bactérias, fungos, protozoários, esporos.

Métodos Físicos

Termorresistentes

• Calor úmido sob pressão: Autoclave
• Calor seco: Estufa (NÃO MAIS RECOMENDADO)

Temperatura e Tempo para Estufa (Calor Seco)

• 171°C - 60 minutos
• 160°C - 120 minutos
• 149°C - 150 minutos
• 141°C - 180 minutos
• 121°C - 12 horas

Métodos Físico-Químicos (Termossensíveis)

• Óxido de etileno (ETO)
• Vapor a Baixa Temperatura de Formaldeído
• Plasma de peróxido de Hidrogênio

Condições Necessárias para o Crescimento Microbiano

Fatores Químicos

• Água
• Macronutrientes
• Micronutrientes
• Fatores de crescimento

Fatores Físico-Químicos (Ambientais)

• Temperatura
• pH
• Pressão osmótica
• O₂ (Oxigênio)

Meio de Cultura

É uma mistura de nutrientes necessários ao crescimento microbiano.

Formulação

• Deve levar em conta o tipo nutritivo a qual o microrganismo pertence.
• Atender às necessidades específicas do grupo, da família, do gênero ou espécie que se deseja cultivar.

Tipos de Meio de Cultura

• Sólidos: (ágar 1-2%)
• Semi-sólidos: (0,075-0,05% ágar)
• Líquidos

Meios Seletivos

Contêm substâncias que inibem o crescimento de determinado grupo e permitem o desenvolvimento de outros.

• Exemplo: Lactose – Diferencia Lac+ (pH cai)
• Seletivo para Gram Negativo (sais biliares inibem G+)

Semeadura

Realizar de modo estéril, para evitar contaminação da amostra, utilizando bico de Bunsen ou capela de fluxo laminar.

Temperatura Ótima para Crescimento

• Psicrófilas: 12°C e 17°C
• Mesófilas: 28°C e 37°C
• Termófilas: 57°C e 87°C

Acima do limite ótimo, ocorre desnaturação proteica e consequente morte celular. Temperaturas inferiores levam a uma desaceleração das atividades metabólicas.

pH

• Neutralidade: pH 7,0
• Ácido: pH 2,0 (H. pylori)

Cada tipo de bactéria apresenta uma temperatura ótima de crescimento.

Osmolaridade e Adaptação

A capacidade dos microrganismos se adaptarem a pressões osmóticas chama-se osmoadaptação.

• Halotolerantes: Toleram altas concentrações de sais (10% NaCl)
• Halofílicos: Requerem alto nível de NaCl (ex: Vibrio cholerae)

Oxigênio

• Aeróbias estritas: Exigem presença de oxigênio (ex: Acinetobacter sp.)
• Microaerófilas: Necessitam de baixos teores de oxigênio (ex: Campylobacter jejuni)
• Facultativas: Utilizam O₂ e desenvolvem-se também na sua ausência (ex: E. coli)
• Anaeróbias: Não toleram o oxigênio (ex: Clostridium tetani e Clostridium botulinum)

Tempo de Geração (Tg)

Intervalo de tempo em que uma célula origina duas novas células ou tempo necessário para uma população dobrar de número. Muitas bactérias estudadas apresentam Tg de 1 a 3 horas (pode variar de 10 min a >24h).

• Tg de E. coli = 20 min
• Em 20 gerações (~7 horas), 1 célula torna-se em > 1 milhão de células!

O Tg pode ser influenciado pelas condições de cultivo (tipo de meio, temperatura, etc.).