h3: Precipitação de Proteínas: Salting In e Salting Out

2.2 Reações de precipitação sem desnaturação:

Fundamento teórico: As proteínas podem ser precipitadas sem sofrer desnaturação em função do pH, força iônica, temperatura e propriedades dielétricas. Estas variáveis podem então ser usadas para separar proteínas em mistura, uma vez que cada proteína tem uma composição característica (qualitativa e quantitativa) de aminoácidos que determina seu comportamento como um polieletrólito.

A capacidade dos sais neutros de influenciar a solubilidade das proteínas é uma função de sua força iônica (precipitação por alteração de força iônica), depende tanto da sua concentração como da valência de cátions e ânions que formam o sal (números de cargas elétricas do sal).

Salting in: É a solubilização das proteínas pela adição de um sal neutro de força iônica baixa (NaCl, NH₄Cl e KCl).

Salting out: É a precipitação reversível das proteínas pela adição de sal de força iônica elevada [MgCl₂ e (NH₄)₂SO₄]. Um dos fatores que promovem esse efeito é que a concentração elevada de sais pode remover a água de hidratação das moléculas proteicas, reduzindo, dessa maneira, sua solubilidade.

Qualquer que seja sua base física, salting in (proteína se solubilize) e salting out (proteína precipite) são processos para a separação de misturas proteicas, uma vez que as diferentes concentrações de sais neutros.

Material e Reativos:

• Clara de ovo in natura.
• Cloreto de sódio 1 N
• Solução saturada de sulfato de amônio
• Pipetas, tubos de ensaio, suporte para tubos, béquer, etc.

Técnica:

a) Pipetar 3 ml de clara de ovo in natura em um pequeno béquer. Diluir com água destilada, mexendo com um bastão de vidro, até notar o aparecimento do precipitado de globulinas (branco - forma esférica). Juntar em seguida, uma solução de cloreto de sódio 1N, gota a gota, até a redissolução do precipitado anterior de proteína não desnaturada. Esta redissolução se deve à restauração da força iônica original e corresponde ao fenômeno do salting in.

b) Da solução da clara de ovo na experiência anterior de salting in, pipetar 2 mL em um tubo de ensaio. Juntar a seguir 2 mL de solução saturada de sulfato de amônio e observar a formação de precipitado proteico, o que corresponde ao fenômeno de salting out. Pipetar a seguir 4 a 6 mL de água destilada a fim de recompor a força iônica anterior e, como consequência, redissolver o precipitado.