Meios de Cultura e Coloração de Gram para Identificação de Bactérias

Meios de Cultura

O meio de cultura é um conjunto de compostos químicos utilizado em laboratório para análises específicas, tais como para a determinação da presença de microrganismos, ele possui formulação que contém substâncias necessárias para que os microrganismos inoculados se multipliquem nesse meio artificial.

Principais Meios de Cultura

• Ágar Nutriente: Simples, barato e de fácil preparo, é utilizado na análise de água, alimentos e leite como meio para cultivo de amostras submetidas a exames bacteriológicos e isolamento de organismos para culturas puras.
• Ágar Sangue: De coloração vermelha escura e opaca, oferece excelentes condições de crescimento.
• Ágar Salmonella-Shigella: Possui componentes que inibem microrganismos gram positivos. Permite selecionar e isolar espécies de Salmonella e Shigella em amostras de fezes, alimentos e água.
• Ágar Chocolate: Utilizado para o cultivo de microrganismos considerados exigentes.

Coloração de Gram

É chamado de coloração de Gram o método de coloração utilizado para diferenciar espécies bacterianas em dois grupos, bactérias gram-positivas e gram-negativas.

Entre os fatores que irão diferenciar gram-positivos de gram-negativos, está a coloração das bactérias, a composição e propriedades químicas e físicas das paredes celulares.

Aplicação do Corante Violeta Genciana

Pinga-se uma gota da cultura bacteriana sobre a lâmina e espalha-se com uma haste de inoculação. Espera-se secar e passar a lâmina suavemente na chama do bico de Bunsen 3x. Você deve esperar esfriar e aí sim cobrir a lâmina com violeta genciana e deixar por 1 minuto e lavar.

Depois que você deixar agir por 60 segundos, as bactérias que tiverem a parede celular mais espessa, terão uma coloração forte já nesse início. Se a parede não for espessa, essa coloração não irá grudar e já irá sair na primeira lavagem.

Então essa primeira coloração já será um diferencial para identificar as bactérias gram positivas.

Aplicação do Lugol

Você irá aplicá-lo sobre as bactérias para fazer com que o corante violeta genciana se fixe na parede das bactérias. Você também irá deixá-lo agir por 1 minuto.

Descoramento com Álcool

Descolorir a lâmina com álcool 95%. As bactérias gram positivas que incorporaram o corante violeta genciana vão incorporar esse corante.

Nesse momento você terá uma lâmina que já tem bactérias gram positivas coradas, mas as gram negativas estão com um roxo bem fraquinho.

Aplicação da Fucsina

Corar as bactérias gram negativas. Obviamente as bactérias que foram coradas com violeta genciana e fixadas com lugol não serão coradas. Sendo esse passo crucial para diferenciação de gram negativas.

Reprodução dos Fungos

Os fungos são organismos eucariontes, unicelulares ou multicelulares, haploides e em sua parede celular possuem quitina. Possuem reprodução sexuada pelos esporos, que pode ser comparado a sementes de plantas.

Os esporos ou conídios precisam de calor e umidade para germinarem e o resultado desta germinação é a formação de um ou mais filamentos finos, chamados de tubos germinativos.

O ciclo de vida dos fungos: Uma somática, quando há alimento e outra reprodutiva, onde os fungos podem realizar a reprodução sexuada ou assexuada, se as estruturas formadas forem de forma assexuada ou sexuada isoladamente ou em grupos então nesse caso forma-se o corpo de frutificação.

Holomorfo: realiza ambas as reproduções, sexuada e assexuada.

Anamorfo: apenas a reprodução assexuada.

Teleomorfo: apenas a reprodução sexuada.

Nutrição dos Fungos

São heterótrofos, possuem a necessidade de retirar do local onde estão o micélio as substâncias que precisa para viver, utilizando inúmeras fontes orgânicas de alimento.

É a partir da nutrição que se tem a obtenção de energia necessária para realizar suas funções, tais como crescimento, manutenção e reparação.

Existem espécies de fungos que se alimentam de matéria orgânica viva, causando doenças em plantas e animais e também causando o apodrecimento de frutas e verduras. Porém existem também fungos cuja nutrição é sapróbia, neste caso os fungos absorvem moléculas oriundas de cadáveres de plantas ou animais. Esses tipos de fungos são importantíssimos na natureza, pois auxiliam as bactérias heterotróficas na reciclagem de elementos químicos que constituem a matéria orgânica.

Crescimento dos Fungos

Disponham de características ideais para o seu crescimento, pode-se destacar:

• Nutrientes: os nutrientes necessários para seus melhor crescimento são os carboidratos, proteínas, vitaminas e sais minerais;
• Umidade: é necessário um nível ideal de umidade do ar no local de desenvolvimento, quanto maior a umidade maior a probabilidade de desenvolvimento fúngico;
• Temperatura: entre 22°C a 30°C;
• Oxigênio: a maioria são anaeróbias facultativas. Com o O2 podem desenvolver mais rapidamente, produzindo CO2 e água com o resíduo do seu metabolismo. Na ausência do O2 crescem mais lentamente, realizando a fermentação onde produz etanol, água e CO2;
• Acidez: o PH ideal para crescimento é 4,5 a 5.

Fase Vegetativa

No processo de desenvolvimento os fungos formam estruturas vegetativas que funcionam como estruturas de resistência, tais como: Rizomorfas, Esclerócios, Clamidosporos. Todas essas estruturas permanecem em repouso quando as condições são desfavoráveis, entrando em atividade em condições favoráveis.

Fase Reprodutiva

Os fungos podem apresentar reprodução assexuada, sexuada e também um mecanismo de recombinação gênica, denominado parassexualidade.