Técnicas Moleculares e Genética: PCR, RFLP e Heredogramas

Eletroforese

Eletroforese: Separa moléculas biológicas com base em suas propriedades elétricas e tamanho. Moléculas mais eletronegativas migram em direção ao ânodo (polo positivo).

PCR Quantitativa (qPCR)

PCR quantitativa: Detecção e quantificação de fluorescência para medição confiável dos amplicons gerados em cada ciclo da PCR. Usada para determinar a presença e a quantidade de RNA e DNA.

A qPCR é mais específica, sensível e reproduzível que a PCR convencional.

• Sonda TaqMan: Indica a sequência do DNA alvo.
• Sistema SYBR Green: Detecta o produto amplificado com um corante fluorescente que se intercala na dupla fita de DNA.

Genes housekeeping: Usados como controle endógeno na PCR em tempo real.

Tipos de quantificação na qPCR:

• Absoluta: Determina o número exato de moléculas.
• Relativa: Análise comparativa do ácido nucleico alvo com o do controle endógeno.

Fatores que interferem na qPCR: Erros de pipetagem, calibragem das pipetas, qualidade dos moldes, desenho dos primers, tamanho do amplicon.

RFLP (Polimorfismo do Comprimento dos Fragmentos de Restrição)

RFLP: Técnica que utiliza diferenças na sequência de DNA, detectáveis pela presença de fragmentos de diferentes comprimentos após digestão com enzimas de restrição.

Aplicações de PCR e RFLP

• Diagnósticos moleculares (fibrose cística, HPV, dengue, H5N1, HIV, tuberculose).
• Identificação e isolamento de genes.
• Marcadores moleculares (ciência forense).
• Expressão gênica.

Ciência Forense e DNA

A ciência forense investiga o DNA para:

• Identificação de suspeitos em crimes sexuais.
• Investigação de paternidade.
• Identificação de restos mortais.
• Relação entre instrumento lesivo e vítima.

O exame de DNA para identificação criminal analisa regiões polimórficas.

Distúrbios Monogênicos

Distúrbios monogênicos: Determinados por alelos em um único loco; geralmente, são distúrbios pediátricos.

Heredogramas

Heredograma: Representação gráfica da herança familiar, usada para determinar se uma característica é autossômica ou ligada ao sexo, dominante ou recessiva.

Fatores que afetam os padrões do heredograma:

• Penetrância: Probabilidade de um gene expressar seu fenótipo.
• Expressividade: Gravidade da expressão do fenótipo.
• Idade de início.

Herança Autossômica Recessiva

Herança autossômica recessiva: Menos comum que a dominante, ocorre apenas em homozigotos (herança de um alelo mutante de cada genitor). Portadores são heterozigotos.

Consanguinidade

Consanguinidade: União entre indivíduos com parentesco de segundo grau ou mais próximo. Aumenta a chance de ambos os genitores serem portadores do mesmo alelo mutante.

Pleiotropia

Pleiotropia: Genes que possuem mais de um efeito perceptível no organismo (ex: Síndrome de Marfan).