Cultivo Celular: Primário, Secundário e Cultivo Viral
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CULTIVO CELULAR
Profa. Carolina Kist Traesel
Uruguaiana, 28 de novembro de 2014
CULTIVO CELULAR
- Cultivo primário
- Cultivo secundário (linhagem celular)
Cultivo Primário
- Tecidos de animais jovens
- Órgãos fetais
Cultivo Primário
- Tratar com tripsina 37ºC/30min
- Centrifugação 3000 rpm/10min
- Incubação em estufa a 37ºC e 5% CO2
- Tapete/monocamada
- Tapete confluente
- Tripsinizar
CULTIVO PRIMÁRIO
- Vírus
- Resiste poucas passagens
- Exigente/delicado
Cultivo Secundário
Células secundárias, linhas celulares, linhagens celulares, células de linhagem, cultivo contínuo, células contínuas.
Sinonímia: Linhagens celulares
Cultivo primário → senescente → algumas células sobrevivem → Linhagens celulares → retomam multiplicação → tornam-se imortais
Células primárias senescentes → tapete confluente → tripsinizar → tripsinizar
Linhagens Celulares
- Mantidas em laboratório por diversas passagens
- Congeladas em nitrogênio líquido
1 2 3 4 5 6 7 8
Linhagens Celulares
- Bovinos: MDBK, CRIB, BL-3, Bt
- Suínos: PK-15, PK-1, SK-6, ST
- Ovinos: FLK
- Caninos: MDCK
- Felinos: CRFK
- Equinos: EDE, OEO
- Coelhos: RK-13
- Primatas: VERO, CV-1, Marc-145, COS
- Humanos: HeLa
Universidade Federal do Pampa
Curso de Medicina Veterinária
Aula prática Microbiologia Veterinária
CULTIVO CELULAR
Profa. Carolina Kist Traesel
Uruguaiana, 05 de dezembro de 2014
Cultivo Viral
- Amostra viral
- Amostra suspeita
- Amostra clínica
- Estoque viral
Tabela de qual tecido para qual doença
| Doença | Animal vivo | Post mortem |
|---|---|---|
| Respiratória e ocular | Swab nasal e conjuntival, sangue | Tecidos afetados, LN, pele e mucosas |
| Swabes, raspados, sangue | Tecidos, LN | |
| Gastroenterites | Fezes, sangue | Tecidos, LN, conteúdo intestinal |
| Sistêmica | Sangue, fezes, swab nasal, urogenital | Tecidos de vários sistemas |
| SNC | Sangue, fezes, swab nasal, urogenital | Tecidos, LN |
| Aborto | Sangue da mãe, muco genital | Placenta, feto |
Inoculação Viral
- Metodologia:
- Adsorção (inóculo)
- Reposição de meio de cultivo
- Incubação 24–72 horas (replicação viral)
Errado → Correto
Cultivo viral – célula não infectada
Cultivo Viral
Células infectadas por vírus citopáticos – visualização do efeito citopático
Tipos/formas de efeito citopático
- Arredondamento celular
- Desprendimento do tapete
- Enrugamento do tapete
- Vacuolização celular
- Lise celular
- Citomegalia
- Sincício
- Corpúsculo de inclusão
Cultivo viral – herpesvírus bovino 2 po 1
Cultivo viral – herpesvírus bovino 2 po 2
Cultivo viral – vírus da diarreia viral bovina
Corpúsculo de inclusão
- In vitro e/ou in vivo
- Intranuclear ou intracitoplasmático
Cultivo Viral
Células infectadas por vírus não citopáticos – sem “lesão celular”
Visualização/detecção de proteínas virais