Identificação de Cocos Gram-Positivos

Coleta de Amostras

Corrimento Nasal

Deve ser obtido para identificar portadores suspeitos de Staphylococcus aureus. Utilize uma zaragatoa (swab) estéril, introduza-a no nariz até à nasofaringe, tocando o septo e o assoalho das narinas. Gire o swab delicadamente, deixe por 10 a 15 segundos e depois remova-o.

Secreção da Faringe

O paciente deve estar confortavelmente posicionado, com boa iluminação. Peça para pronunciar a letra "A", utilizando um abaixador de língua para abaixá-la. Esfregue o swab em ambas as amígdalas e na parede posterior da faringe com movimentos rotativos. Não toque na língua ou na úvula.

Expectoração (Escarro)

O paciente deve escovar os dentes apenas com água pura, realizando lavagens repetidas (não deve usar creme dental). Colete o escarro no início da manhã em um frasco estéril. A amostra deve apresentar aspeto mucopurulento.

Coloração de Gram

1. Coloque as colônias em estudo numa lâmina limpa, misturando-as com solução salina estéril para fixar a preparação.
2. Passe a lâmina suavemente pela chama do bico de Bunsen até que todo o líquido evapore, evitando o superaquecimento. Coloque as lâminas no suporte de coloração.
3. Cubra a lâmina com cristal violeta por um minuto.
4. Adicione a solução de iodo (lugol) por um minuto.
5. Lave com água corrente e descolore com álcool-acetona.
6. Cubra a lâmina com o corante de contraste (fucsina ou safranina) por cerca de 30 segundos e enxágue.
7. Deixe a lâmina secar inclinada.
8. Observe ao microscópio com objetiva de imersão de 100x (ocular de 10x).

Na coloração de Gram, as bactérias devem ser observadas quanto à forma, coloração (Gram-positivas ou Gram-negativas), tamanho e agrupamento. Uma vez que as bactérias se desenvolvam nas culturas, devem-se observar as características das colônias para definir o gênero e a espécie.

Testes de Identificação Bioquímica

Teste da Catalase

A catalase é uma enzima que decompõe o peróxido de hidrogênio em oxigênio e água. Este teste diferencia os membros da família Micrococcaceae daqueles pertencentes à família Streptococcaceae (como o gênero Streptococcus).

Procedimento/Resultado: O rápido aparecimento de bolhas de gás ou efervescência indica uma reação positiva. O gênero Micrococcus apresenta reação positiva, enquanto o gênero Streptococcus apresenta reação negativa.

Teste da Coagulase

A coagulase é uma proteína com atividade enzimática capaz de converter o fibrinogênio em fibrina, provocando a formação de um coágulo visível em um sistema adequado de análise.

Procedimento/Resultado: A reação positiva é revelada pela formação de um coágulo ou gel. A bactéria Staphylococcus aureus é coagulase-positiva.

Teste de Fermentação da Glicose

Este teste diferencia o gênero Micrococcus do gênero Staphylococcus, pois este último apresenta resultado positivo para a fermentação da glicose.

Teste de Fermentação de Manitol a 1%

Cepas de Staphylococcus aureus, em contraste com Staphylococcus epidermidis, possuem a capacidade de fermentar o manitol com produção de ácido.

Procedimento/Resultado: A mudança da cor inicial do meio para o amarelo indica uma reação positiva devido à acidificação.

Teste da DNase

Este teste é útil na identificação de cepas de Staphylococcus aureus, que produzem a enzima DNase, responsável por hidrolisar o DNA.

Procedimento/Resultado: Uma mudança de cor no meio ao redor da colônia indica a hidrólise do DNA (reação positiva).

Família Streptococcaceae

São cocos Gram-positivos agrupados em pares ou cadeias. Em meios de cultura sólidos, formam colônias pequenas e translúcidas.

Categorias de Importância Clínica

Diferentes gêneros podem ser classificados de acordo com suas propriedades imunológicas, hemolíticas e/ou bioquímicas. Ao cultivá-los em ágar sangue, deve-se determinar suas características hemolíticas.

Propriedades Hemolíticas

O tipo de hemólise produzida em ágar sangue é extremamente útil para a identificação de Streptococcus. Os meios utilizados devem ser isentos de açúcares. A incubação em uma atmosfera de CO₂ pode inibir a produção de hemólise.

Dependendo do tipo de hemólise, são classificados como:

• Alfa-hemolíticos: Apresentam hemólise parcial, com alteração da hemoglobina em meta-hemoglobina.
• Beta-hemolíticos: Apresentam hemólise total dos glóbulos vermelhos pela ação de hemolisinas (Estreptolisinas S e O).
• Gama-hemolíticos: Não produzem qualquer tipo de hemólise.

Propriedades Bioquímicas

São classificados com base em reações bioquímicas que permitem distinguir as seguintes espécies:

• Streptococcus pyogenes
• Streptococcus viridans
• Streptococcus pneumoniae