Identificação de Cocos Gram-Positivos
Coleta de Amostras
Corrimento Nasal
Deve ser obtido para identificar portadores suspeitos de Staphylococcus aureus. Utilize uma zaragatoa (swab) estéril, introduza-a no nariz até à nasofaringe, tocando o septo e o assoalho das narinas. Gire o swab delicadamente, deixe por 10 a 15 segundos e depois remova-o.
Secreção da Faringe
O paciente deve estar confortavelmente posicionado, com boa iluminação. Peça para pronunciar a letra "A", utilizando um abaixador de língua para abaixá-la. Esfregue o swab em ambas as amígdalas e na parede posterior da faringe com movimentos rotativos. Não toque na língua ou na úvula.
Expectoração (Escarro)
O paciente deve escovar os dentes apenas com água pura, realizando lavagens repetidas (não deve usar creme dental). Colete o escarro no início da manhã em um frasco estéril. A amostra deve apresentar aspeto mucopurulento.
Coloração de Gram
- Coloque as colônias em estudo numa lâmina limpa, misturando-as com solução salina estéril para fixar a preparação.
- Passe a lâmina suavemente pela chama do bico de Bunsen até que todo o líquido evapore, evitando o superaquecimento. Coloque as lâminas no suporte de coloração.
- Cubra a lâmina com cristal violeta por um minuto.
- Adicione a solução de iodo (lugol) por um minuto.
- Lave com água corrente e descolore com álcool-acetona.
- Cubra a lâmina com o corante de contraste (fucsina ou safranina) por cerca de 30 segundos e enxágue.
- Deixe a lâmina secar inclinada.
- Observe ao microscópio com objetiva de imersão de 100x (ocular de 10x).
Na coloração de Gram, as bactérias devem ser observadas quanto à forma, coloração (Gram-positivas ou Gram-negativas), tamanho e agrupamento. Uma vez que as bactérias se desenvolvam nas culturas, devem-se observar as características das colônias para definir o gênero e a espécie.
Testes de Identificação Bioquímica
Teste da Catalase
A catalase é uma enzima que decompõe o peróxido de hidrogênio em oxigênio e água. Este teste diferencia os membros da família Micrococcaceae daqueles pertencentes à família Streptococcaceae (como o gênero Streptococcus).
Procedimento/Resultado: O rápido aparecimento de bolhas de gás ou efervescência indica uma reação positiva. O gênero Micrococcus apresenta reação positiva, enquanto o gênero Streptococcus apresenta reação negativa.
Teste da Coagulase
A coagulase é uma proteína com atividade enzimática capaz de converter o fibrinogênio em fibrina, provocando a formação de um coágulo visível em um sistema adequado de análise.
Procedimento/Resultado: A reação positiva é revelada pela formação de um coágulo ou gel. A bactéria Staphylococcus aureus é coagulase-positiva.
Teste de Fermentação da Glicose
Este teste diferencia o gênero Micrococcus do gênero Staphylococcus, pois este último apresenta resultado positivo para a fermentação da glicose.
Teste de Fermentação de Manitol a 1%
Cepas de Staphylococcus aureus, em contraste com Staphylococcus epidermidis, possuem a capacidade de fermentar o manitol com produção de ácido.
Procedimento/Resultado: A mudança da cor inicial do meio para o amarelo indica uma reação positiva devido à acidificação.
Teste da DNase
Este teste é útil na identificação de cepas de Staphylococcus aureus, que produzem a enzima DNase, responsável por hidrolisar o DNA.
Procedimento/Resultado: Uma mudança de cor no meio ao redor da colônia indica a hidrólise do DNA (reação positiva).
Família Streptococcaceae
São cocos Gram-positivos agrupados em pares ou cadeias. Em meios de cultura sólidos, formam colônias pequenas e translúcidas.
Categorias de Importância Clínica
Diferentes gêneros podem ser classificados de acordo com suas propriedades imunológicas, hemolíticas e/ou bioquímicas. Ao cultivá-los em ágar sangue, deve-se determinar suas características hemolíticas.
Propriedades Hemolíticas
O tipo de hemólise produzida em ágar sangue é extremamente útil para a identificação de Streptococcus. Os meios utilizados devem ser isentos de açúcares. A incubação em uma atmosfera de CO₂ pode inibir a produção de hemólise.
Dependendo do tipo de hemólise, são classificados como:
- Alfa-hemolíticos: Apresentam hemólise parcial, com alteração da hemoglobina em meta-hemoglobina.
- Beta-hemolíticos: Apresentam hemólise total dos glóbulos vermelhos pela ação de hemolisinas (Estreptolisinas S e O).
- Gama-hemolíticos: Não produzem qualquer tipo de hemólise.
Propriedades Bioquímicas
São classificados com base em reações bioquímicas que permitem distinguir as seguintes espécies:
- Streptococcus pyogenes
- Streptococcus viridans
- Streptococcus pneumoniae