Inoculação e Quantificação Microbiana: Guia Completo

Inoculação e Quantificação Microbiana

Semeadura ou Plaqueamento

Semear um microrganismo é colocá-lo em um ambiente adequado, em meio de cultura apropriado ao seu desenvolvimento e reprodução.

Levar em consideração:

• As técnicas de assepsia nas manipulações;
• Esterilidade do meio e dos instrumentos de inoculação;
• Meios de cultura empregados.

Natureza do Inóculo

O inóculo pode ser composto por secreções, fluidos orgânicos, produtos patológicos, fragmentos de tecidos, amostras de alimentos, etc., provenientes de crescimento em meio sólido ou líquido.

Meios de Cultura

A semeadura, plantio ou inoculação de bactérias em meios de cultura visa propiciar o crescimento microbiano específico e possibilitar sua quantificação.

• Sólido: em tubo (coluna ou inclinado), placa e garrafa de Roux.
• Líquido: em balão ou tubo.
• Semissólido: em tubo.

Tipos de meios:

• Pré-enriquecimento: dessensibilização de microrganismos injuriados.
• Enriquecimento: crescimento de microrganismos presentes em baixo número ou de crescimento lento/fastigiosos.
• Diferenciais: apresentam substâncias que diferenciam microrganismos parecidos.
• Seletivos: inibem o desenvolvimento de determinados microrganismos, permitindo o crescimento de outros.
• Indicador: facilita a identificação de um determinado microrganismo.
• Manutenção: conservação dos microrganismos.

Quantificação Microbiana

A contagem microbiana é normalmente registrada como o número de células por mililitro de líquido ou grama de material. Como as populações bacterianas são muito grandes, utilizam-se métodos de contagem direta ou indireta.

Contagem Direta

Realizada em microscópio (10mL da suspensão, fixadas e coradas em lâmina ou analisadas a fresco). É rápida, porém possui limitações: não distingue células vivas de mortas e pode apresentar contagens errôneas devido a pequenas dimensões ou formação de agregados.

Contagem Indireta (Contagem em Placa)

Procedimento realizado após uma série de diluições seriadas. É um dos métodos mais utilizados por medir o número de células viáveis.

• Desvantagem: requer 24 horas ou mais para a formação de colônias visíveis.
• UFC (Unidades Formadoras de Colônias): Idealmente, placas devem ter de 25 a 250 colônias (recomendação da FDA), embora alguns prefiram de 30 a 300.

Diluições Seriadas e Semeadura

Para contar populações em alimentos, uma parte da amostra é misturada com nove partes de água, formando um homogeneizado. Os métodos de plaqueamento incluem:

• Método de incorporação em placas (pour plate);
• Método de espalhamento em placas (spread plate).

Lembretes importantes:

• Antes de quantificar, precisamos diluir as amostras;
• Antes de quantificar, precisamos plaquear as bactérias em meio apropriado;
• Antes de quantificar, precisamos incubar as bactérias em temperatura adequada.