Transferencia de plasmídio entre bacterias "função matemática"

Melhoramento convencional Novas combinações de genes são produzidas cruzamentos de indivíduos escolhidos; Aumentou significativamente a produtividade das plantas; O alcance de novos patamares de produtividade está sendo impedido pela restrição da variabilidade genética encontrada nas diferentes espécies cultivadas Resultado do próprio processo de melhoramento.

 Mutáções  (evolução)Processo primário de criação de variabilidade, mantidas na população por seleção natural e recombinações genéticas; Mutáções Induzidas  (melhoramento genétiço)Técnica que tem por objetivo o aumento da variabilidade da espécie que se quer melhorar.  Meios químicos ou físicos, como radiações.

Mutáções Induzidas  (melhoramento genétiço)  ocorrem de forma aleatória, não podem ser direcionadas,  são recessivas,  difíceis de ser detectadas,  normalmente são prejudiciais, ou levam a alterações associadas, muitas delas indesejáveis.

Mutáções Induzidas  (melhoramento genétiço) QUANDO USAR? Plantas de reprodução vegetativa sem reprodução por sementes ou  com produção ocasional por sementes

Hibridação apresenta muitas dificuldades ou é inviável Espécies com pouquíssima variabilidade.Busca de carácterísticas agronomicamente desejáveis barreiras de isolamento reprodutivo cultivo in vitro de embriões híbridos.O cruzamento entre plantas escolhidas só é possível quando as mesmas são sexualmente compatíveis. Engenharia genética Manipulação direta do material genétiço: Transferência de genes de um organismo pára outro, ou

Introdução de genes sintetizados artificialmente. Isolar genes individuais de uma espécie e inseri-los em outra, Sem a necessidade de compatibilidade sexual. Método de cruzamento: intraespecífico ou interespecífico, Melhorista interessado em uma ou poucas carácterísticas - grandes blocos de genes são transferidos da planta doadora pára a receptora, mesmo após várias gerações de seleção.

Oganismo geneticamente modificadoÉ aquele cujo material genétiço (DNA e RNA) tenha sido modificado por qualquer técnica de engenharia genética, ao passo que esta, por sua vez, é a atividade de manipulação de moléculas DNA/RNA recombinante .Transformação genética Clonagem e isolamento do gene Desenvolver bibliotecas genômicas Sondas apropriadas pára reconhecer o gene Vetores – transformação.

Enzimas e restrições tesouras" moleculares, que a bactéria emprega pára se defender dos bacteriófagos Enzimas produzidas por bactérias pára restringir a proliferação de vírus invasoresOs elementos básicos pára a transformação gênica são: Enzimas de Restrição (endonucleases de restrição) – cortam o DNA em sítios específicos; Enzimas de Ligação (ligases) – permitem a união do DNA fragmentado.

Bibilhoteca São coleções de sequências de DNA Genes recombinantes Utilização diversa Isolamento de um gene Sequenciamento Clonagem....  

Plasmídeo: DNA circular citoplasmátiço existente em algumas bactérias;

Ligase: adicionar outro fragmento de DNA que contenha o gene de interesse; Bactéria portadora do plasmídeo transformado: utilizada pára clonagem deste gene (multiplicação em meio de cultura) ou como vetor pára transferência do gene pára outra espécie.Plasmídeo: DNA circular citoplasmátiço existente em algumas bactérias; Ligase: adicionar outro fragmento de DNA que contenha o gene de interesse;Bactéria portadora do plasmídeo transformado: utilizada pára clonagem deste gene (multiplicação em meio de cultura) ou como vetor pára transferência do gene pára outra espécie.

Gene resistente a penicilina 1. Uma origem de réplicação;  Um gene marcador selecionável (em geral confere resistência a drogas); Sítio de clivagem única.Vetores de clonagem Pequenas moléculas de DNA; Capazes de amplificar, em centenas de cópias, a informação genética que nelas foi inserida.DNA circular, bifilamentar extracromossômico; presente em microorganismos, principalmente bactérias.

Como identificar os clones transformados? Células de E. Coli são sensíveis a ampicilina: as transformadas com plasmídeos conferem resistência ao antibiótiço. Apenas as células transformadas serão capazes de crescer na presença de ampicilina. Os plasmídeos de clonagem têm uma segunda marcá de resistência a antibióticos (em geral, tetraciclina), que é perdida quando o plasmídeo é aberto e o inserto é clonado.

Etapas isolamento do DNA de dois organismos de célula humanas e bactérias o dna e transferido pára mesma enzima de restrição, extratores livres de duas moléculas de DNA  adicionando ligases  do DNA os plasmídio com DNA recombinado.Bacterias cada uma delas tendo genes humanos. 

Plasmídio Genes ligados a transferência e integração desse plasmídeoCapaz de introduzir parte do seu genoma na planta hospedeira.

Sendo assim, qualquer sequência que for colocada nessa região será transferida junto com o plasmídeo Região de virulência Etapas básicas Obtenção do plasmídeo Ti desarmado Gene de interesse e um gene marcador Resistência a antibiótiço.

Regeneração Genes marcadores Gene hpt - antibiótiço higromicina Gene aro A - resistência herbicida glifosato Genes repórteres Gene gus – precipitado azul Gene luc – produz luz verde-amarelada .

Ferimento do tecido A bactéria penetra na célula Expressão dos genes de Vir O T-DNA começa a ser preparado As bordas 25pb são reconhecidas - VirD1/D2 e clivadas T-DNA  em associação com proteínas é exportado Direcionado pára o núCléo VirD2 e VirE2 Se integra ao genoma da planta

Biobalistica Aceleração de micropartículas Ouro ou tungstênio Atravessam a parede celular e a membrana plasmática, carreando o DNA pára o interior do célula.

As partículas de ouro com o DNA de interesse Complexo partícula-DNA acelerado sob vácuo atingindo o tecido alvo.