Coloração de Gram: técnica, preparo e resultados

O que é coloração de Gram e para que serve

O método da coloração de Gram baseia-se na capacidade das paredes celulares de bactérias Gram-positivas de reterem o corante cristal violeta no citoplasma durante o tratamento com etanol-acetona, enquanto as paredes celulares de bactérias Gram-negativas não o fazem.

A técnica tem importância clínica, pois muitas das bactérias associadas a infecções são prontamente observadas e caracterizadas como Gram-positivas ou Gram-negativas em esfregaços de pus ou de fluidos orgânicos.

Técnica: descrição geral

Descrever a técnica da coloração de Gram passo a passo.

Procedimentos

• Preparar esfregaços a partir de culturas puras de Escherichia coli, Staphylococcus aureus e Serratia marcescens.
• Corar os esfregaços pelo método de coloração de Gram.
• Observar ao microscópio óptico, sob imersão, e identificar a morfologia desses microrganismos e sua reação ao método de Gram.

Preparo do esfregaço

1. Pegar uma lâmina limpa do recipiente, secá-la e flambar rapidamente na chama do bico de Bunsen;
2. Identificar o lado da lâmina onde será feito o esfregaço;
3. Flambar a alça bacteriológica, deixá-la esfriar e colocar na lâmina uma gota de solução salina fisiológica;
4. Flambar a agulha bacteriológica, deixá-la esfriar próxima à chama, abrir a placa com a cultura-teste e tocar a colônia escolhida para retirada da amostra;
5. Esfregar o material com movimentos rotatórios da alça bacteriológica para obter um esfregaço oval, fino e uniforme;
6. Deixar secar nas proximidades da chama;
7. Fixar o esfregaço passando a lâmina (lado oposto ao esfregaço) 5 vezes na chama do bico de Bunsen (rapidamente).

Método de Coloração de Gram

1. Cobrir toda a lâmina com solução de cristal violeta (corante roxo) e aguardar 1 minuto;
2. Lavar rapidamente com água destilada;
3. Cobrir a lâmina com solução de lugol (mordente) por 1 minuto;
4. Lavar com água destilada;
5. Inclinar a lâmina e gotejar álcool-acetona ou álcool absoluto por cerca de 15 segundos; lavar rapidamente em água corrente;
6. Cobrir com fucsina de Gram e aguardar 30 segundos;
7. Lavar a lâmina em água destilada e secar (sem esfregar);
8. Colocar uma gota de óleo de cedro sobre a lâmina e observar com objetiva de imersão (100x).

RESULTADO: bactérias Gram-positivas: roxo
bactérias Gram-negativas: rosa/vermelho

Aplicabilidade do corante de contraste

Qual a aplicabilidade do corante de contraste?

A coloração recorre ao uso de corantes e permite aumentar o contraste e evidenciar a estrutura bacteriana.

Fator predominante na coloração de Gram

Qual o fator predominante da coloração de Gram?

Entre os fatores que diferenciam Gram-positivos de Gram-negativos estão a coloração das bactérias e a composição e propriedades químicas e físicas das paredes celulares.

Microrganismos em lodos ativados

Quais os grupos de microrganismos envolvidos no processo de lodos ativados?

Os principais tipos de microrganismos na estabilização aeróbica de efluentes são bactérias, algas, protozoários e metazoários.

Ciclo do nitrogênio

Descreva o ciclo do nitrogênio.

Plantas – bactérias fixadoras – morte das bactérias – amônia – nitritos – bactérias desnitrificantes – liberação de N2.