Guia Completo: Isolamento de DNA, PCR e Variações
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Isolamento de DNA Genómico a Partir de Tecidos Vegetais Frescos
O processo de isolamento de DNA genómico a partir de tecidos vegetais frescos envolve as seguintes etapas:
Ruptura das células, utilizando:
- Brometo de Cetil Trimetilamónio (CTAB): atua como tampão.
- 2-Mercaptoetanol: inibidor de DNAses.
- Ácido Etilenodiaminotetracético (EDTA): agente quelante.
Separação de proteínas por desidratação e salting-out com solução concentrada de NaCl (em simultâneo com a homogeneização).
- A solução é desproteinada por extração com uma solução de clorofórmio-álcool isoamílico.
- O clorofórmio é um desnaturante proteico.
- O álcool regula a densidade da solução final.
- As proteínas desnaturadas formam uma camada de separação (fase orgânica/
- A solução é desproteinada por extração com uma solução de clorofórmio-álcool isoamílico.