Questões Resolvidas de Microbiologia Geral

Este material reúne questões resolvidas de exames de microbiologia, abordando temas essenciais como domínios dos seres vivos, crescimento bacteriano, técnicas de esterilização, coloração de Gram e testes bioquímicos.

1. Quais são os 3 domínios e suas principais características?

• Bacteria: células procarióticas com espécies patogênicas e não patogênicas, unicelulares.
• Archaea: células procarióticas não patogênicas, unicelulares, extremófilas.
• Eukarya: células eucarióticas, com estruturas mais complexas e organizadas, possuem organelas e são uni ou multicelulares.

2. Fases de crescimento bacteriano e técnicas de contagem

• Fase de adaptação (lag): taxa de crescimento igual a zero.
• Fase exponencial (log): taxa de crescimento máxima e constante.
• Fase estacionária: taxa de crescimento igual a zero.
• Fase de morte (declínio): taxa de crescimento negativa.

Para realizar a contagem, utiliza-se a câmara de Neubauer e a quantificação de massa celular. Na contagem de células viáveis, pode ocorrer o uso de corantes vitais ou diluições seriadas e contagem em placa.

4. Caso Clínico: Abscesso na Cavidade Oral

Um material coletado na cavidade oral do paciente, com quadro clínico de abscesso, foi levado a um laboratório de análises para cultura, identificação do microrganismo causador do quadro clínico e antibiograma.

A) Quais os procedimentos que devem ser feitos para o isolamento do microrganismo causador do quadro clínico, antes que a identificação do mesmo possa ser efetuada?

O procedimento a ser feito é a técnica de esgotamento. Uma alça de inoculação estéril deve ser mergulhada na cultura mista e, posteriormente, devem-se fazer estriamentos na placa de Petri em três divisões, de forma que as estrias não encostem umas nas outras. Essa técnica faz com que a quantidade de material contida na alça seja progressivamente menor. Dessa maneira, restam apenas células do microrganismo isolado.

B) Por que não podemos utilizar o material coletado diretamente para a cultura e diagnóstico laboratorial?

Porque o material coletado não seria necessariamente uma colônia pura, podendo conter mais de um tipo de microrganismo. Sendo assim, o diagnóstico não seria preciso.

5. Diferença entre Transformação, Transdução e Conjugação

• Transformação: a transferência de genes ocorre de forma direta. O DNA livre no meio é incorporado por uma célula receptora, que poderá integrá-lo ao seu genoma e apresentar alterações genéticas.
• Transdução: o mecanismo ocorre de forma indireta, via bacteriófagos. Ou seja, a transferência de DNA da célula doadora para a receptora é mediada por um vetor viral.
• Conjugação: a transferência de DNA ocorre de forma direta através de plasmídeos, por meio de células que expressam o pili sexual.

6. Análise de Testes Bioquímicos

Pergunta: Um pesquisador, ao tentar identificar uma bactéria, realizou os seguintes testes: teste VP (+); presença de enzima amilase (+); teste SIM: motilidade (+) e indol (-); e presença de enzima catalase (+). Analisando os resultados obtidos, existe algum resultado não esperado? Diga qual ou quais, justificando sua resposta.

7. Alvos dos Antimicrobianos

Escolha um dos alvos dos antimicrobianos e explique-o:

Parede celular: Os antimicrobianos impedem a síntese completa de peptideoglicana, enfraquecendo a parede celular. Os beta-lactâmicos possuem como mecanismo de ação o efeito bactericida; eles inibem a ação das transpeptidases e promovem a atividade de autolisinas, enzimas que degradam a peptideoglicana.

8. Etapa Fundamental da Coloração de Gram

Qual é a etapa fundamental da coloração de Gram? O que separa as bactérias Gram-positivas (Gram+) e Gram-negativas (Gram-)?

A etapa fundamental é a Etapa 3 (descoloração). Nesse momento, é aplicada uma solução orgânica (o etanol), onde todas as células Gram+ permanecem roxas e as Gram- tornam-se incolores. Na Etapa 4 (coloração de contraste), é possível separar visualmente as Gram+ das Gram-, a partir do momento em que ocorre uma nova coloração, onde as Gram+ continuam roxas e as Gram- tornam-se cor-de-rosa.

9. Métodos de Esterilização

Como se esteriliza:

• A) Soro com bactéria: Filtração.
• B) Luvas: Radiação.
• C) Objetos de plástico: Radiação.
• D) Tesoura de metal: Calor.

Prova de Microbiologia — 2017.1

2. Quais as estruturas importantes para formar o biofilme oral?

• Polissacarídeos extracelulares: além de promoverem a aderência, mantêm a integridade do biofilme, retêm enzimas extracelulares, previnem a desidratação e o ataque por agentes nocivos, e aglutinam nutrientes essenciais, o que favorece o desenvolvimento de microrganismos.
• Glicocálix: região rica em carboidratos localizada na superfície externa da célula que auxilia na captação de nutrientes próximos às células, permite a ligação intercelular e a adesão às superfícies.
• Pili: filamentos longos e delgados que promovem a adesão das bactérias à superfície, prevenindo a remoção pela ação mecânica da saliva, líquidos e alimentos.

4. Qual a importância dos antimicrobianos atuando na parede celular e ribossomos? Explique os beta-lactâmicos ou aminoglicosídeos.

Os antimicrobianos que atuam na parede celular impedem a síntese completa de peptideoglicana, enfraquecendo-a. Os beta-lactâmicos possuem como mecanismo de ação o efeito bactericida: eles inibem a ação das transpeptidases e promovem a atividade de autolisinas, que são enzimas que degradam a peptideoglicana.

6. Teste Bioquímico: Fermentação, VM e VP

Pergunta: Em um teste com fermentação positiva, VM e VP negativos, o tubo sem óleo mineral deu positivo e o com óleo deu negativo. Diga se há contradição.

Resposta: Sim, a contradição ocorreu no fato de o tubo sem óleo mineral ter dado positivo e o com óleo ter dado negativo, pois, se ocorreu fermentação, deveria ter ocorrido o inverso.

7. Coloração de Gram: Inversão de Corantes

O que acontece se trocar o corante primário com o secundário?

Ocorre a mudança de cores.

9. Esterilização de Substâncias Termolábeis

Um pesquisador realizou a autoclavação de uma vitamina termolábil. Ele agiu corretamente? Qual outro método pode ser usado?

Não, ele não agiu corretamente. A vitamina perderia suas estruturas quando submetida a altas temperaturas. A técnica ideal para esterilizar substâncias termolábeis é a filtração.

Prova de Microbiologia — 2016.2

1. Análise de Bactéria Gram-Negativa Facultativa

A bactéria representada é Gram-negativa e facultativa, podendo usar o oxigênio como aceptor final da cadeia de transporte de elétrons. Pergunta-se:

A) Quais são os mecanismos que essa bactéria usa para produção de energia? Explique qual é o mecanismo que gera o maior rendimento energético.

Na presença de O₂, realizam respiração; na ausência de O₂, realizam fermentação. A respiração aeróbica é a que gera o maior rendimento energético, produzindo de 36 a 38 moléculas de ATP por molécula de glicose, enquanto a fermentação gera apenas 2 ATPs.

B) Que estrutura é responsável pela sua forma e rigidez? Explique baseado na composição química da estrutura.

A parede celular. Ela é constituída por peptideoglicanos formados por dois açúcares alternados que são ligados por ligações beta-1,4, constituindo um polímero que se liga a outros por meio de pontes de tetrapeptídeos, formando uma rede resistente que dá forma à célula.

C) Que estruturas presentes nesta bactéria são alvos da ação dos antimicrobianos?

A parede celular, os ácidos nucleicos, os ribossomos e a membrana citoplasmática.

D) Cite e explique um mecanismo de resistência da bactéria aos quimioterápicos.

Os beta-lactâmicos inibem a ação das transpeptidases, comprometendo a síntese de peptideoglicanos e impedindo a formação da parede celular, o que torna a bactéria vulnerável à lise osmótica. Um mecanismo de resistência consiste na alteração das transpeptidases para que resistam à penicilina. Outro mecanismo é a produção de beta-lactamases, que inativam o anel beta-lactâmico, anulando a ação da penicilina.

2. Crescimento Bacteriano e Patogênese

Como as bactérias crescem e qual a importância desse processo para o estabelecimento das doenças?

As bactérias crescem exponencialmente devido à sua capacidade de divisão celular por fissão binária, onde uma célula-mãe origina duas células-filhas, que geram quatro, e assim sucessivamente. Elas possuem alta capacidade de autoduplicação. Esse crescimento rápido faz com que a doença se estabeleça com maior rapidez.

3. Controle do Crescimento Microbiano

A) Qual a diferença entre esterilização e desinfecção?

A esterilização é a eliminação completa de qualquer forma de vida, incluindo fungos, vírus e esporos. A desinfecção é um processo que elimina parcialmente os microrganismos.

B) Que tipo de agente é empregado como esterilizante na técnica de autoclavação e qual sua vantagem?

O agente empregado é o calor úmido sob pressão. A vantagem é que ele submete o microrganismo a uma temperatura de 121 °C, sendo capaz de destruir até mesmo os esporos que algumas bactérias produzem.

C) Marque com "X" os materiais listados abaixo que não podem ser esterilizados por autoclavação. Justifique sua resposta, explicando qual seria a técnica recomendada.

• ( ) Caldo simples
• ( ) Óleo mineral
• (X) Alça de inoculação — Recomendação: Flambagem.
• ( ) Solução de enzima beta-galactosidase
• ( ) Solução salina
• ( ) Solução de tetraciclina

7. Isolamento de Cultura Pura a partir da Saliva

Como proceder para isolar e identificar uma cultura pura a partir da saliva? Como comprovar a presença de somente um microrganismo após o isolamento?

Utiliza-se o método de esgotamento. Com uma alça de inoculação, realizam-se estriamentos em três divisões na placa de Petri, em meio nutritivo, de forma que as colônias sejam isoladas progressivamente. Pode-se realizar outro isolamento em outra placa para obter maior precisão do material isolado e, posteriormente, realizar a coloração de Gram.

9. Interpretação do Teste de Disco-Difusão (Antibiograma)

O que representa a ausência e a presença de um halo de inibição do crescimento bacteriano ao redor de um disco comercial contendo o antibiótico tetraciclina?

A ausência de um halo de inibição significa que a bactéria é resistente ao antibiótico. Já na presença do halo, é necessário medir o diâmetro em milímetros e conferir uma tabela padrão para determinar se a bactéria é sensível ou se a quantidade não foi suficiente para sensibilizá-la.

Prova de Microbiologia — 2016.1

2. Como se esteriliza um tubo com soro fisiológico + tubo com sangue de coelho?

Por meio de filtração, pois ambos possuem substâncias termolábeis.

3. Diferença entre Endósporo e Célula Vegetativa

O endósporo é uma forma de vida metabolicamente inerte, altamente resistente ao calor, ressecamento e adversidades ambientais, formado por bactérias sob condições de escassez de nutrientes e estresse do meio. A célula vegetativa é metabolicamente ativa, convivendo em meio com condições favoráveis à vida e com nutrientes específicos para a bactéria.

4. Como se obtém uma cultura pura a partir de um abscesso?

Uma alça de inoculação estéril deve ser mergulhada na cultura mista e, posteriormente, devem-se fazer estriamentos na placa de Petri em três divisões, de forma que as estrias não encostem umas nas outras. Essa técnica faz com que a quantidade de material contida na alça seja progressivamente menor. Dessa maneira, restam apenas células do microrganismo isolado.

5. Como ocorre a coloração de Gram e qual a importância do álcool?

Aplica-se o corante primário (cristal violeta), observando que todas as bactérias ficam roxas. Em seguida, aplica-se uma solução de iodo (lugol), mantendo-as roxas. Logo após, realiza-se a descoloração com álcool, onde um grupo permanece corado (Gram+) e outro perde a cor (Gram-). As descoradas são submetidas a um segundo corante (de contraste) para diferenciação. O álcool é fundamental para diferenciar as bactérias, pois remove a membrana externa lipídica das Gram-, permitindo que o corante primário seja extraído e o segundo corante seja absorvido.

7. Qual membrana possui maior proporção de proteínas: eucariótica ou procariótica? Por quê?

A membrana procariótica. Por não apresentarem organelas, os procariotos realizam a maior parte de suas ações metabólicas na membrana plasmática, possuindo, portanto, maior quantidade de proteínas.

Prova de Microbiologia — 2015.2

2. Análise de Gráfico com Curva de Crescimento

A) Qual a temperatura ideal para o crescimento da bactéria?

A temperatura ideal é de 27 °C.

Nota sobre métodos de contagem: O método de contagem direta ocorre através da área, porém não torna possível identificar quais células estão mortas e quais estão vivas. Com isso, utiliza-se o método de contagem em placa, que permite identificar a quantidade de células viáveis.

Prova de Microbiologia — 2015.1

6. Classifique como Verdadeiro (V) ou Falso (F) e justifique:

• A) Ferver um tubo a 100 °C contendo uma mistura: [Sem resposta no original]
• B) Esterilizar uma pipeta na autoclave: Verdadeiro (V).
• C) Esterilizar uma solução fisiológica no forno de Pasteur: Falso (F). Pode perder suas propriedades.
• D) Esterilizar uma tesoura com radioatividade: [Sem resposta no original]

8. Explique os resultados encontrados nos testes bioquímicos:

• Teste da Glicose = Positivo: Coloração rosada, indicando fermentação.
• Teste do Citrato = Positivo: Coloração azul, indicando meio alcalino.
• Teste do SIM = Negativo: Não reage, não fica roxo/rosado.